一步法miRNA反转录试剂盒 返回列表页

商品属性：

描述：由于 miRNAs 分子序列较小，仅 20nt 左右，没有 真核生物有的 Poly(A)尾巴结构，采用传统 Oligo dT 引 物和随机引物很难获得从 miRNA 到 cDNA 的反转录产 物。 公司开发出一套全新的加 A 法 miRNA 反转 录试剂盒，基于 Peter 改良的 miR-Q 技术， 可以对成熟的 miRNA 同时完成加 A 反应和反转录反应， 直接获得含有特异性 tag 和 15(T)的 cDNA 产物（如图 1 所示）。该方法使得 miRNA 反转录与 mRNA 的反转录一 样轻松。直接将提取的 miRNA 与反应缓冲液混合物混合， 并置于 PCR 仪上 1 小时即可获得高浓度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 产物。获得的 cDNA 产物适用于 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行定量检测，该方法 已被大量文献所采用。 

储存：请置于-20°C，可保存 2 年；避免反复冻融
操作方法
1. 按以下组分配制反转录反应液
miRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特别说明： 10×miRNA RT Primer 引物为
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’，定量扩增
用特异性上下游引物进行扩增，图 2 是以 hsa-miR-21 为
实例说明特异性上下游引物的设计方法
2. 在 PCR 仪上按以下条件进行反应:
 37°C 60min
 95°C 5min
3. 获得 cDNA 产物后使用 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行 miRNA 定量检测。

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