pBM28 Toposmart 克隆试剂盒 返回列表页

商品属性：

保存条件：-20℃保存。
产品介绍：
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM28载体中。适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5 等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。pBM28 载体类似于公司的pENTR/D-TOPO入门载体， 具有attL1 和attL2，为gateway系统中的入门载体。引物M13F(-21)和M13R可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点：
（1）连接反应仅需 5 分钟。
（2）只适合平末端 PCR 产物的快速、高效、定向克隆。
（3）载体采用了新的制备工艺，零背景，无需蓝白斑筛选。
（4）与pBM27载体相比，pBM28载体无标签序列。
（5）载体为壮观霉su抗性。
注意事项：
（1）引物要求：PCR 引物5’端不能进行磷酸化修饰，普通商业化引物即可。上游引物的5’ 端添加CACC 四个碱基（CACC 为真核表达所必需的Kozak 序列）。
（2）DNA 聚合酶：选用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和Xerox 等高保真DNA 聚合酶用于PCR 扩增。
（3）连接时间：5-15 分钟，一般为 15 分钟。
（4）连接温度：室温 (22℃-37℃)，可使用PCR仪控温。最佳反应温度为25℃。若片段有高GC等复杂结构，可在37℃反应。
（5）产物要求：为保证PCR产物完整，建议72℃后延伸5-10分钟。连接前使用琼脂糖凝

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