细胞培养染色体标本形态

细胞培养用于遗传学分析常见的是体外培养的细胞株，多为恶性肿瘤细胞株，且呈贴壁生长，仅小数细胞株为悬浮生长。培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和染色体标本制出清晰度高等优点。组织细胞培养基染色体制备的关键是掌握好体外细胞的生长动态，只有处在对数生*的细胞才能出现较高的分裂相，所以积水仙素处理的时机及量是染色体标本形态及分裂指数的关键。
1、实验材料
培养基液（PRMI 1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度离心管，直吸管及弯头吸管，培养瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、载玻片。
2、培养液配制
培养液85-95%
小牛血清5-15%
双抗（选择）100u/ml
3、操作过程
（1）培养基细胞：选择处于指数生*、用大瓶培养的80-90%汇合单层培养细胞；
（2）终止培养：当有大量圆形发亮细胞出现时，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培养混合液，置温箱继续培养6-10小时以抑制分裂期细胞停止于分裂中期；
（3）聚集细胞：
（A）摇动法：
可利用分裂中期细胞培养基变圆与底物附着不牢特点，此时可持培养瓶，左右反复横向水平摇动，可使90%的中期分裂细胞从瓶壁脱落；
（B）消化法：
将培养液倒入离心管内，给培养瓶内加0.025%*液0.5-1ml/瓶，水平左右摇动，便培养瓶底壁面*接触消化酶，稍后用弯头吸管吹打，待细胞*脱落后，加入3-5ml前培养终止消化。用吸管移入装有培养基液的离心管内2000rpm10分钟。弃上清液，留沉淀细胞；
（4）低渗处理：给沉淀细胞加顶温的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均匀，在温箱中静置20-30分钟；
（5）预固定：向低渗处理适当的离心管中加新鲜配制的3∶2甲醇，冰乙醇固定液1-2ml，用吸管轻松吹打调匀，此措施能起到使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞培养基粘连成块。
（6）细胞培养固定：800-1000rpm10分钟，弃上清液加新鲜配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml，加入时要沿管壁慢慢加入，后轻轻吹打，封口后室温静置30分钟以上，反复三次；
（7）制片：末次离心后，倒掉上清液，留沉淀细胞，加新鲜配制固定液0.5ml左右，混匀后*制片，其它同外周血方法。
中药对照药材    卷柏(垫状卷柏）    2.0g.    中药对照药材
中药对照药材    麦芽    10.0g    中药对照药材
中药对照药材    花椒    2.0g    中药对照药材
中药对照药材    芦根    1.0g    中药对照药材
中药对照药材    扶芳藤    10.0g    中药对照药材
中药对照药材    伸筋草    1.0g    中药对照药材
中药对照药材    鸡冠花    2.0g    中药对照药材
中药对照药材    苦楝皮    2.0g    中药对照药材
细胞培养