EGY48 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

5-鸟苷三磷酸二钠盐 容量： 25克

shēng huà shì jì 5-鸟苷二磷酸二钠盐 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 5-氯代水杨酸 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 5-*一磷酸二钠盐 容量： 1克

shēng huà shì jì 5-*三磷酸三钠盐 容量： 250克

shēng huà shì jì 5-*二磷酸三钠盐 容量： RT 50克

shēng huà shì jì 5-核黄素*二水物 容量： 17.5KU

shēng huà shì jì 5-核黄素* 容量： 保存：-20℃ 1KU

shēng huà shì jì 5-氟乳清酸 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 5-氟* 容量： 100克

sEGY48 感受态细胞 100ul*50 ēng huà shì jì 5-* 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 5-碘-2-脱氧尿苷 容量： RT 250毫克

shēng huà shì jì 5-碘-2-脱氧胞苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 5-胞苷一磷酸二钠盐 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 5-胞苷三磷酸四钠盐溶液 容量： 25克

shēng huà shì jì 5-胞苷三磷酸三钠盐 容量： 5克

shēng huà shì jì 5-胞苷三磷酸二钠盐 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 5-胞苷二磷酸二钠盐 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 5-胞苷二磷酸单钠盐 容量： 100克

shēng huà shì jì 5-氨基水杨酸 容量： 25克

shēng huà shì jì 5-AMP琼脂糖凝胶4B 容量： 30U

shēng huà shì jì 50ml离心管 容量： 保存：-20℃ 2.5U

shēng huà shì jì 50bp DNA Ladder 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 50%纯度卵黄

Anglne(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

AR42J(大鼠胰腺外分泌细胞) 5×106cells/瓶×2

ARPE-19(人视网膜上皮细胞) 5×106cells/瓶×2

AsPC-1(人胰腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

AtT-20(小鼠垂体瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

B16(小鼠黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

Bcap-37(人腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BEL-7402(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BEL-7404(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BGC823(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BHK-21(仓鼠肾细胞) 5×106cells/瓶×2

BIU-87(人膀胱癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BRL-3A(大鼠正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2

BNL CL.2(小鼠胚胎肝细胞) 5×106cells/瓶×2

BRL(大鼠肝细胞) 5×106cells/瓶×2

BSC-1(猴肾细胞) 5×106cells/瓶×2

BT-474(人腺导管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BT-549(人乳管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

水 容量： 1米

shēng huà shì jì 5′- 胞苷单磷酸 容量： 1公斤

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。