R5421 感受态细胞 100ul*5-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder I 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder Ⅱ 容量： 100克

shēng huà shì jì 1000ul吸头 容量： 保存：-20℃ 1KU

shēng huà shì jì 1000ul无菌盒装吸头 容量： 保存：-20℃ 1毫克

shēng huà shì jì 1000ul盒装吸头 容量： 1KU

shēng huà shì jì 1000ul盒装无菌带滤芯吸头 容量： 保存：-20℃ 500U

shēng huà shì jì 1000ul袋装无菌滤芯吸头 容量： 500ug

shēng huà shì jì 1.8ml外旋冻存管 容量： 2～8℃ 250毫克

shēng huà shì jì 1.8ml内旋冻存管 容量： 500U

shēng huà shì jì 1.8cm细胞刀 容量： 保存：-20℃ 1克

R5421 感受态细胞 100ul*5shēng huà shì jì 1.5ml离心管盒 容量： 100KU

shēng huà shì jì 1.5ml离心管 容量： 保存：-20℃ 150u

shēng huà shì jì 1.5ml冻存管 容量： 1.2KU

shēng huà shì jì 1.4-双（5-苯基-2-恶唑）苯 容量： 2.5升

shēng huà shì jì 1.2ml冻存管 容量： 2～8℃ 500u

shēng huà shì jì 1,8-二羟基蒽醌 容量： 100克

shēng huà shì jì 1，7-庚二胺 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 1，6-己二醇 容量： 100克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸四水物 容量： 500克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸钠 容量： 2～8℃ 10克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸 容量： 100克

shēng huà shì jì 1,5-二羟基萘 容量： 100克

shēng huà shì jì 1,4-双(5-苯基-2-噁唑基)苯 容量： 2.5升

shēng huà shì jì 1,4-二氧六环 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 1，4-二溴丁烷 容量： 2～8℃ 100毫克

shēng huà shì jì 1,4-二羟基萘 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 1,4-二羟基蒽

A-498(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2

A875(人黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

AM(人腺样囊性癌细胞（高转移）) 5×106cells/瓶×2

BC-009(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BC-019(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BC-020(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BC-021(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BC-022(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BE(2)-M17(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

BGC-803(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2

C918(人眼脉络黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

CAL-27(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

LS 180(人结肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

CNE-2Z(人鼻咽癌细胞) 5×106cells/瓶×2

COLO 201(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

CW-2(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2

CRT(人神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

D283 Med(人脑髓母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

EA.hy926(人脐静脉细胞融合细胞) 5×106cells/瓶×2

ECV-304(人脐静脉内皮细胞) 5×106cells/瓶×2

EJ(人膀胱癌细胞) 5×106cells/瓶×2

H-97(人高转移肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

HCC94(人子宫鳞癌细胞（高分化）) 5×106cells/瓶×2

HCCLM3(人高转移肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

HEL(人红白细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

HELF(人胚肺成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2

HO-8910PM(人高转移卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

Ishikawa(人子宫内膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2

L-O2(人正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2

M1(小鼠白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

M14(人黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

MA-891(小鼠细胞癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2

MDA-MB-435(人细胞癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2

MDA-MB-468(人细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

25克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。