Y190 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì

shēng huà shì jì 1-溴代辛烷 容量： 1克

shēng huà shì jì 1-溴代萘 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 1-溴代庚烷 容量： 2～8℃ 250毫克

shēng huà shì jì 1-辛醇 容量： 0.5毫升

shēng huà shì jì 1-十一碳烯 容量： 2～8℃ 200毫升

shēng huà shì jì 1-十四烯 容量： 100T

shēng huà shì jì 1-十八烯 容量： 避光，-20℃ 25T

shēng huà shì jì 1-壬醇 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 1-羟基苯并三氮唑一水物 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-羟基-2-萘甲酸 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-萘* 容量： 保存：-20℃ 0.25毫升

shēng huà shì jì 1-萘酚 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-甲基咪唑 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 1-甲基-2-吡咯烷酮 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮 容量： 2～8℃ 5U

shēng huà shì jì 1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基吡唑啉酮 容量： 1克

shēng huà shì jì 1-苯基-3

SK-MES-1(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

SK-N-SH(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

SK-OV-3(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

SMMC-7721(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

SP2/0(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

SPC-A-1(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

ST(猪睾细胞) 5×106cells/瓶×2

SY190 感受态细胞 100ul*50 TO(小鼠胚成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2

SVEC4-10(小鼠淋巴结内皮细胞) 5×106cells/瓶×2

SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化细胞) 5×106cells/瓶×2

SW480(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2

SW579(人甲状腺鳞癌细胞 ) 5×106cells/瓶×2

SW620(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2

SW626(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

T-24(人膀胱癌细胞) 5×106cells/瓶×2

T-47D(人细胞管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

T84(人结肠腺癌肺转移细胞) 5×106cells/瓶×2

Tca-8113(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2

TE-1(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

TF-1(人血液白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

THP-1(人髓系白血病单核细胞) 5×106cells/瓶×2

烷酮 容量： 50U

shēng huà shì jì 1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸钠 容量： 25克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。