BY4741 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸三钠盐 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸二钠盐 容量： 5克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷-5′-二磷酸三钠盐 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷-5′-单磷酸二钠 容量： 100克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷-5′-单磷酸 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胞苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′5′-ADP琼脂糖凝胶4B 容量： 5KU

BY4741 感受态细胞 100ul*50 shēng huà shì jì 2.0ml离心管 容量： 1KU

shēng huà shì jì 2.0ml冻存管 容量： 2KU

shēng huà shì jì 2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲啰啉 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 2，9-二甲基-1，10-菲罗啉 容量： 1升

shēng huà shì jì 2,8-二甲基喹啉 容量： 500克

shēng huà shì jì 2，6-二叔丁基对甲酚 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 2,6-二氯醌-4-氯亚胺 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 2,6-二氯靛酚钠盐 容量： 25克

shēng huà shì jì 2,6-二氯靛酚 容量： 5克

shēng huà shì jì 2,5-双(5-叔丁基苯并噻唑-2)噻吩 容量： 5克

shēng huà shì jì 2,5-双(5-叔丁基-2-苯并恶唑基)噻吩 容量： 2～8℃ 10毫克

shēng huà shì jì 2，5-二羟基苯甲酸 容量： 25克

shēng huà shì jì 2,5-二甲基环己醇 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 2,5-二苯恶唑 容量： 500毫升

shēng huà shì jì 2，4-二硝基氯苯 容量： 1克

shēng huà shì jì 2，4-

OP9(小鼠骨髓基质细胞) 5×106cells/瓶×2

OS-RC-2(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2

OVCAR-3(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

P19(小鼠畸胎瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

P388D1(小鼠淋巴样瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

P815(小鼠肥大细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

PA317(小鼠成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2

PANC-1(人胰腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

PC-3(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

PIEC(猪髋动脉内皮细胞 ) 5×106cells/瓶×2

PK-15(猪肾细胞) 5×106cells/瓶×2

QGY-7701(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

RBE(人胆管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

RBL-2H3(大鼠嗜碱性细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

RD(人恶性胚胎横纹肌瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

RF/6A(猴视网膜血管内皮细胞) 5×106cells/瓶×2

RH-35(大鼠肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

RKO(人结肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

肼 容量： 25克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。