使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：
产品名称：番茄内标准LAT52基因染料法PCR试剂盒
货号:CP96887
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是番茄内标准LAT52基因染料法PCR试剂盒公司正在热销的产品：
Guinea pig IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit资源名称科氏葡萄球菌解脲亚种种属:Staphylococcuscohniisubsp.urealyticus分离基物:人类皮肤
Guinea pig IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit资源名称头葡萄球菌解脲亚种种属:Staphylococcuscapitissubsp.urealyticus分离基物:人体皮肤
Guinea pig IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit资源名称木贼镰孢种属:Fusariumequiseti分离基物:花菜籽
Guinea pig MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit资源名称Amycolatopsisdecaplanina种属:Amycolatopsisdecaplanina分离基物:土壤
Guinea pig MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit资源名称Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila种属:Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila分离基物:土壤
Guinea pig MYO(Myoglobin) ELISA Kit资源名称棘孢小单胞菌种属:Micromonosporaechinospora安全等级:1
Guinea pig NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit资源名称大孢链霉菌种属:Streptomycesmacrosporus安全等级:1
Guinea pig NOS3/eNOS(Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit资源名称紫红链霉菌种属:Streptomycesviolaceoruber分离基物:土壤
Guinea pig OC/BGP(Osteocalcin) ELISA Kit资源名称法国蜜环菌种属:Armillariella│gallica提供形式:斜面培养物
Guinea pig PCSK9(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9) ELISA Kit资源名称中间普氏菌（不提供）种属:Prevotellaintermedia分离基物:脓胸
Guinea pig PEDF(Pigment Epithelium Derived Factor) ELISA Kit资源名称绿叶假单胞菌种属:Pseudomonas│chlororaphis提供形式:冻干物
Guinea pig PIIINP(N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit资源名称紫芝(紫灵芝，中华灵芝)种属:Ganoderma│sinense提供形式:斜面培养物
Guinea pig PIINP(Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit资源名称变色栓菌（云芝）（斜面）种属:Trametes versicolor提供形式:斜面培养物
Guinea pig RANTES(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed And Secreted) ELISA Kit资源名称头状葡萄球菌头状亚种种属:Staphylococcus│capitis subsp. capitis提供形式:冻干物
Guinea pig TIMP-1(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit资源名称Z小弧菌种属:Vibrio mimicus提供形式:冻干物
Guinea pig TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit资源名称肠沙门氏菌肠亚种伤寒血清型种属:Salmonella│enterica subsp. enterica serovar Typhi提供形式:冻干物
Guinea pig TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit资源名称鸭沙门氏菌种属:Salmonella anatum提供形式:冻干物
Guinea pig TGF-β1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit资源名称嗜鞣管囊酵母种属:Pachysolen tannophilus提供形式:冻干物，斜面
Guinea pig VEGF-A(Vascular Endothelial cell Growth Factor A) ELISA Kit资源名称志贺毒性大肠埃希氏菌种属:Escherichia coli STEC分离基物:腹泻病例粪便标本
Guinea pig IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit资源名称总状横梗霉种属:Lichtheimia│ramosa提供形式:斜面培养物
番茄内标准LAT52基因染料法PCR试剂盒HP|HP-1|hp2-alpha|HPA1S|binding peptide|BP|haptoglobin alpha(1S)-beta|haptoglobin alpha(2FS)-beta|haptoglobin|alpha polypeptide|haptoglobin|beta polypeptide|HP2AL|PHA2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(MLST)产品用途：添加万古霉素即为MLST,用于阪崎肠杆菌PCR检验方法选择性增菌。(GB、SN、ISO)产品规格;225ml/X10袋冷藏：2-8℃
IFN-γ|IFNG|IFG|IFI|Type II Interferon哥伦比亚血平板产品用途：哥伦比亚血平板用于一般病原菌的分离培养和溶血性细菌的鉴别。产品规格：90mmX20个冷藏：2-8℃
Immunoglobulin E巧克力平板培养基(普通)产品用途：巧克力平板培养基(普通)用于分离奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。产品规格：90mmX20个冷藏：2-8℃
IgG(Immunoglobulin G)巧克力平板培养基（单抗）产品用途：添加万古霉素，用于分离奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。产品规格：90mmX20个冷藏：2-8℃
IL-10|IL10|IL10A|CSIF|TGIF沙氏琼脂平板产品用途：沙氏琼脂平板用于真菌的分离培养，还用于一次性使用卫生用品真菌菌落总数检测。(GB)产品规格：90mmX20个冷藏：2-8℃
IL-6(Interleukin 6)|IL6|BSF2|HGF|HSF|IFNB2|CDF营养肉汤产品用途：营养肉汤用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌等，也可用于消毒效果测定。(GB)产品规格：10mlX20支冷藏：2-8℃
IL-8|IL8|CXCL8|GCP-1|GCP1|LECT|LUCT|LYNAP|MDNCF|MONAP|NAF|NAP-1|NAP1|3-10C|AMCF-I|K60营养琼脂（斜面）用途：营养琼脂（斜面）用于普通菌种的保存。（GB、ISO)产品规格：20支/盒冷藏：2-8℃
KIM-1|HAVCR1|HAVCR|HAVCR-1|KIM-1|KIM1|TIM|TIM-1|TIM1|TIMD-1|TIMD1双糖铁斜面产品用途：双糖铁斜面用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖，及产生硫化氢的生化反应。(GB)产品规格：20支/盒冷藏：2-8℃
