使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：
产品名称：转基因品系大豆GU262探针法qPCR试剂盒
货号:CP96975
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是转基因品系大豆GU262探针法qPCR试剂盒公司正在热销的产品：
Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) ELISA Kit资源名称鸭疫里氏杆菌种属:Riemerella│anatipestifer分离基物:鸭心血
Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit资源名称乳房链球菌种属:Streptococcus│uberis分离基物:患病奶牛
Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA Kit资源名称氏杆菌种属:Pasteuerlla│gallinarum分离基物:水牛
Human FETUB(Fetuin B) ELISA Kit资源名称牛溶血链球菌种属:Streptococcus│bovis分离基物:牛
Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit资源名称山羊葡萄球菌种属:Staphylococcus│caprae分离基物:羊
Human FG(Fibrinogen) ELISA Kit资源名称猪葡萄球菌种属:Staphylococcus│hyicus分离基物:猪心
Human FGF23(Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit资源名称非洲马瘟病毒（VI型）种属:类戊肝病毒属│提供形式:冻干物
Human FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit资源名称非洲马瘟病毒（IX型）种属:类戊肝病毒属│提供形式:冻干物
Human FGFR3(Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit资源名称流产布鲁氏菌 生物Ⅵ型种属:Brucella│abortus BiovarⅥ提供形式:冻干物
Human FGFR4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit资源名称Alternaria angustiovoidea种属:Alternaria│angustiovoidea分离基物:茎
Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit资源名称Amycolatopsis keratiniphila subsp. nogabecina种属:Amycolatopsis│keratiniphila subsp. nogabecina提供形式:冻干物
Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit资源名称Chlamydomyces palmarum种属:Chlamydomyces│palmarum分离基物:根
Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit资源名称Mycetocola reblochoni种属:Mycetocola│reblochoni提供形式:冻干物
Human FGβ(Fibrinogen Beta) ELISA Kit资源名称Myrmecridium sp.种属:Myrmecridium│sp.提供形式:斜面培养物
Human f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit资源名称Pestalotiopsis cocculi种属:Pestalotiopsis│cocculi分离基物:根
Human FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit资源名称Tritirachium roseum种属:Tritirachium│roseum分离基物:土壤
Human FLOT2(Flotillin 2) ELISA Kit资源名称暗灰色马杜拉放线菌种属:Actinomadura│atramentaria提供形式:冻干物
Human Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit资源名称棒状链霉菌种属:Streptomyces│clavuligerus提供形式:斜面培养物
Human FOXC1(Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit资源名称北里孢菌属种属:Kiatasatospora│griseola提供形式:斜面培养物
Human ITG αⅤβ3(Integrin αⅤβ3) ELISA Kit资源名称草色串孢种属:Torula│herbarum分离基物:植物残体
转基因品系大豆GU262探针法qPCR试剂盒CTAG| CTAG1| ESO1| LAGE2| LAGE2A| Cancer/testis antigen 6.1| L antigen family member 2形态特性 上皮细胞生长特性 贴壁生长特征特性 CSAp阴性(CSAp-)。 结肠抗原3，阴性。 角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。 癌基因c-myc, K-ras, H-ras, myb, sis 和fos的表达呈阳性。 未检测到癌基因N-myc和N-ras的表达。 表达肿瘤特异的核基质蛋白CC-4，CC-5和CC-６。 培养条件 L15: Leibovitz Medium 优质胎牛血清，10%
HSP-40(Heat Shock Protein 40)|DNAJB1|Hdj1|HSPF1|DnaJ(Hsp40) homolog|subfamily B|member 1|dnaJ homolog subfamily B member 1|DnaJ protein homolog 1|DNAJ1|hDj-1|Heat shock 40 kDa protein 1|HSP40|Human DnaJ protein 1|radial spoke 16 homolog B|RSPH16B|Sis1形态特性 上皮细胞生长特性 贴壁生长特征特性 C-33 A 细胞株是N. Auersperg从宫切片中建立的一系列细胞株(参见ATCC CRL-1594和ATCC CRL-1595)中的一株。 细胞一开始就表现出亚二倍体核型及上皮细胞形态。 连续传代可以观察到核型不稳定。 存在成视网膜细胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。 P53表达上调，且有一个273位密码子的点突变导致Arg -> Cys的替换。 人瘤病毒DNA及RNA阴性。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 优质胎牛血清，10%
OGFR| opioid growth factor receptor|Protein 7 60| Zeta type opioid receptor形态特性 上皮细胞生长特性 贴壁生长特征特性 这株细胞来源于一个细胞集落不规则没有显著角质化的侵染性鳞状细胞癌。 单层培养的细胞间可以观察到带状连接，也注意到有细胞质张力丝。 1970年发现支原体污染并去除。 肿瘤坏死因子(TNF)α抑制ME-180的生长。 这株细胞含有人瘤病毒(HPV)DNA，与HPV-39的同源性高于HPV-18。 培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 优质胎牛血清，10%
CALCB(Calcitonin gene-related peptide 2)|CALC2|Beta-CGRP|CGRP-II|Beta-type CGRP|Calcitonin gene-related peptide II形态特性 上皮细胞生长特性 贴壁生长特征特性 这株细胞是J. Sykes于1974年建立的（参考ATCC HTB-33）。 有报告称MS751细胞含有人状瘤病毒18 (HPV-18)序列。 [22995] [23180] 后来发现MS751细胞包含HPV-45基因组的一部分，而其中E6/E7区域表达呈poly(A)+RNA的形式。 [49721] 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 优质胎牛血清，10%
AMY||NOEL1|Noelin|NOELIN1|OlfA|olfactomedin 1|OLFM1形态特性 上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性 人肝胆管癌细胞。据说产CEA和CA19-9。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 优质胎牛血清，10%
BHLHB1| bHLHe19| OLIG2| OLIGO2| PRKCBP2| RACK17形态特性 上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性 据报道产球蛋白和甲胎蛋白。 培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清，10%
INSR|CD220|CD220 antigen|HHF5|insulin receptor|IR形态特性 上皮细胞样生长特性 贴壁生长特征特性 人肝癌细胞株。这株细胞从裸鼠体外移植瘤中建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 优质胎牛血清，10%
HABP1|C1QBP(Hyaluronan Binding Protein 1)|gC1qBP|gC1qR|SF2p32|p32|Glycoprotein gC1qBP|HABP1p33|GC1q-R protein|C1q globular domain-binding protein|gC1Q-R|Hyaluronan-binding protein 1|Mitochondrial matrix protein p32|splicing factor SF2-associated protein形态特性 上皮细胞生长特性 贴壁生长特征特性 SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。 此细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。 在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 优质胎牛血清，10%
