使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：
产品名称：大麦内标准gamma-hordein基因PCR试剂盒
货号:CP96874
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是大麦内标准gamma-hordein基因PCR试剂盒公司正在热销的产品：
Bovine Cr(Creatinine) ELISA Kit资源名称刺囊毛霉种属:Mucor spinosus提供形式:冻干物
Bovine Es(ESTROGEN) ELISA Kit资源名称休哈塔假丝酵母休哈塔亚种种属:Candida│shehatae var. shehatae分离基物:棘草花金龟体内
Bovine Lep(Leptin) ELISA Kit资源名称棘孢木霉种属:Trichoderma│asperellum提供形式:冻干物
Bovine Ifabp(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit资源名称长枝木霉种属:Trichoderma│longibrachiatum提供形式:冻干物
Bovine L-FABP(Liver Fatty acid Binding Protein) ELISA Kit资源名称赤散囊菌种属:Eurotium│rubrum分离基物:双望目镜
Bovine TFF3(Trefoil factor 3) ELISA Kit资源名称赭曲霉种属:Aspergillus│ochraceus提供形式:冻干物
Bovine ACTG2(Actin Gamma 2, Smooth Muscle) ELISA Kit资源名称棒束青霉种属:Penicillium│clavigerum提供形式:冻干物
Bovine ALPI(Alkaline Phosphatase, Intestinal) ELISA Kit资源名称鲜绿青霉种属:Penicillium│viridicatum分离基物:空气
Bovine CLDN3(Claudin 3) ELISA Kit资源名称膨端青霉种属:Penicillium│inflatum分离基物:冷杉根部
Bovine NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) ELISA Kit资源名称粟酒裂殖酵母种属:Schizosaccharomyces│pombe提供形式:冻干物
Bovine IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit资源名称降酮短杆菌种属:Brevibacterium│ketosoreductum分离基物:土壤
Bovine PAP(Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit资源名称格氏李斯特氏菌种属:Listeria│grayi提供形式:冻干物
Bovine TL-3(Interleukin-3) ELISA Kit资源名称布雷正青霉种属:Eupenicillium│brefeldianum提供形式:冻干物
Bovine DAO(Diamine Oxidase) ELISA Kit资源名称微细正青霉种属:Eupenicillium│parvum分离基物:土壤
Bovine PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit资源名称红色篮状菌种属:Talaromyces│ruber分离基物:植物块根
Bovine Jun(Jun Proto-Oncogene) ELISA Kit资源名称赭鲑色正青霉种属:Eupenicillium│ochrosalmoneum分离基物:玉米粉
Bovine FG(Fibrinogen) ELISA Kit资源名称肠沙门氏菌肠亚种种属:Salmonella│enterica subsp. enterica提供形式:冻干物
Bovine OC(Osteocalcin) ELISA Kit资源名称摩氏摩根氏菌种属:Morganella morganii提供形式:冻干物
Bovine PaRathyroid hormone ELISA Kit资源名称肠沙门氏菌肠亚种旺兹沃思血清型种属:Salmonella│enterica subsp. enterica serotype Wandsworth提供形式:冻干物
Bovine ALOX12(Arachidonate-12-Lipoxygenase) ELISA Kit资源名称热生肿块芽孢杆菌种属:Tuberibacillus│calidus分离基物:堆肥
大麦内标准gamma-hordein基因PCR试剂盒BOLA-DQA2大豆酪蛋白琼脂颗粒培养基大豆酪蛋白琼脂颗粒培养基用于普通的或营养要求较高的细菌以及用于医药工业洁净室无菌程度的监测及消毒剂效果的测试。【检验原理】酪蛋白胰酶消化物和大豆粉木瓜蛋白酶消化物提供氮源、维生素和生长因子;维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
F11R营养肉汤颗粒培养基营养肉汤颗粒培养基用于一般细菌培养、复壮、增菌等，也可用于消毒剂定性消毒效果测定。【检验原理】蛋白胨和粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;能维持均衡的渗透压。
CD11A|Integrin alpha L|ITGAL|LFA 1|LFA 1A|LFA1A营养肉汤颗粒培养基营养肉汤颗粒培养基用于一般细菌培养、复壮、增菌等。【检验原理】胨和牛肉浸出粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;能维持均衡的渗透压。
B7-2|CD86|Activation B7-2 antigen|B70|B7-2 antigen|B-lymphocyte activation antigen B7-2|BU63|CD28 antigen ligand 2|CD28LG2|CD86 antigen|CD86 molecule|CTLA-4 counter-receptor B7.2|FUN-1|LAB72|T-lymphocyte activation antigen CD86XLD琼脂颗粒培养基XLD琼脂颗粒培养基用于临床标本及食品中沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养。【检验原理】酵母膏粉提供氮源、维生素、生长因子;维持均衡的渗透压;木糖、乳糖、蔗糖为可发酵糖类，产酸使酚红指示剂变黄;去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌，但不影响沙门氏菌的生长;硫代硫酸钠可被某些细菌还原硫化氢，与柠檬酸铁铵中的铁盐生成黑色硫化铁;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂。
CD8A|T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain|T-lymphocyte differentiation antigen T8|Leu-2EC肉汤颗粒培养基EC肉汤颗粒培养基用于多管发酵法测定粪大肠菌群和大肠杆菌的确证试验。【检验原理】胰蛋白胨提供碳氮源;3号胆盐抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;乳糖是可发酵的糖类;磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂;可维持均衡的渗透压。
HCK亚盐胱氨酸增菌液颗粒培养基亚酸盐胱氨酸增菌液颗粒培养基用于沙门氏菌选择性增菌培养。【检验原理】蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;乳糖是可发酵的糖类;氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性肠道菌;磷酸盐是缓冲剂;L-胱氨酸为还原剂。
58 kDa microsomal protein|Disulfide isomerase ER 60|ER protein 57|ER protein 60|ER60|ERp57|ERp60|ERp61|GRP57|GRP58|HsT17083|P58|PDIA3|PI PLC|Protein disulfide isomerase A3玫瑰红钠琼脂颗粒培养基玫瑰红钠琼脂培养基(颗粒培养基)供药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养用。【检验原理】胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氢钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长;琼脂是培养基的凝固剂。
CCR1胆盐乳糖颗粒培养基胆盐乳糖颗粒培养基用于药品中大肠杆菌和绿脓杆菌的增菌培养。【检验原理】胨提供碳氮源;乳糖是可发酵的糖类;维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂;牛胆盐和去氧胆酸钠为选择性抑菌剂。
