大豆内标准lectin基因染料法PCR试剂盒

参数规格：
产品名称：大豆内标准lectin基因染料法PCR试剂盒
货号:CP96872
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下是大豆内标准lectin基因染料法PCR试剂盒公司正在热销的产品：

PLGA ELISA Kit ASH1蛋白抗体
Plg ELISA Kit 芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白2抗体
PAP ELISA Kit 血管内皮细胞迁移蛋白抗体
PL/Fbn ELISA Kit 醛糖还原酶相关蛋白质抗体
FN ELISA Kit 胆汁酸结合蛋白DDH2抗体
BV ELISA Kit 血管生成素样蛋白3抗体
Cyclin-D3 ELISA Kit 甘油酯激酶线粒体抗体
Cyclin-D2 ELISA Kit 磷酸化内收蛋白a1抗体
Cyclin-D1 ELISA Kit 自噬体ATG16L2蛋白抗体
Cyclin-A2 ELISA Kit 酸性磷酸酶抗体
CDK2 ELISA Kit 酸性磷酸酶抗体
CCNA1 ELISA Kit 极光激酶A相互作用蛋白1抗体
SOCS-3 ELISA Kit 载脂蛋白样蛋白6抗体
SOCS-1 ELISA Kit 凋亡相关蛋白TGFb信号抗体
cFn ELISA Kit A2LD1蛋白抗体
MEPE ELISA Kit α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶α4Gn-T抗体
CYP21B ELISA Kit 芳香乙酰胺脱乙酰基酶抗体
CYP21A ELISA Kit 芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白4抗体

凋亡相关蛋白3抗体 IGFBP7/MAC25/PSF ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)ELISA试剂盒
自噬相关蛋白18抗体 IGFBP-5 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)ELISA试剂盒
自噬相关蛋白4A抗体 IGFBP-4 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒
载脂蛋白A4抗体 IGFBP-3 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒
12脂氧合酶抗体 IGFBP2 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒
血管紧张素III抗体 IGFBP-1 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒
腺苷酸环化酶3抗体 IGFBP-3 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋3(IGFBP-3)ELISA试剂盒
血管动蛋白抗体 IGFBP-2 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋2(IGFBP-2)ELISA试剂盒
腺病毒早期E1A蛋白抗体 IGFBP-1 ELISA Kit 胰岛素样生长因子结合蛋1(IGFBP-1)ELISA试剂盒
磷酸化活化复制因子2抗体 IGF-2R ELISA Kit 胰岛素样生长因子2受体(IGF-2R)ELISA试剂盒
大豆内标准lectin基因染料法PCR试剂盒磷酸化活化复制因子2抗体 IGF-2 ELISA Kit 胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒
磷酸化失调症蛋白1抗体 IGF2BP2 ELISA Kit 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)ELISA试剂盒
锚蛋白重复结构域蛋白17抗体 IGF-1 ELISA Kit 胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒
胞质乙醛脱氢酶1抗体 IRS-2 ELISA Kit 胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA试剂盒