产品介绍:
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10 )是一种以JC-10 为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。 JC-10 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-10 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-10 不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-10 为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过 JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。 JC-10 单体的大激发波长为 515nm ,大发射波长为529nm;JC-10 聚合物的大激发波长为585nm ,大发射波长为590nm 。实际观察时,使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。 本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品,本试剂盒共可以检测 100 个样品;对于 12 孔中的样品,本试剂盒共可以检测200 个样品。 储存条件:-20℃避光,避免反复冻融,有效期一年。 |
中文名称:线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)
英文名称:Mitochondrial Membrane Potential Kit(JC-10 Assay)
产品规格:100T
货号:FS-X9679
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
血纤蛋白原(Fbg)英文名:Fbg 脂肪组织分化相关蛋白抗体包装100g
血纤蛋白(fibrin)英文名:fibrin 脂联受体1抗体包装25g
血栓B2(TXB2)英文名:TXB2 肾上腺髓质受体抗体包装500g
血栓A2(TXA2)英文名:TXA2 脂联抗体包装1g
血栓前体蛋白(TpP)英文名:TpP 肾上腺髓质抗体包装1g
血清总补体(CH50)英文名:CH50 腺苷受体A3抗体包装5g
血清/血清胺(ST)英文名:ST ADRA2肾上腺能受体2抗体包装1g
血清淀粉样蛋白A3(SAA3)英文名:SAA3 肾上腺能受体β1抗体包装5g
血清淀粉样蛋白A(SAA)英文名:SAA 肾上腺能受体β2/β2-AR抗体包装1g
血浆激肽释放(KLKB1)英文名:KLKB1 晚期糖基化终末产物抗体包装25g
血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)英文名:GMP-140 软骨蛋白聚糖抗体包装5g
血红氧合2(HO-2)英文名:HO-2 5-基乙酰合1抗体包装100g
血红氧合1(HO-1)英文名:HO-1 p53凋亡激蛋白1抗体包装500g
血管性血友病因子/瑞斯托霉辅因子(vWF)英文名:vWF P53凋亡激蛋白2抗体包装250mg
血管舒缓激肽(BK)英文名:BK 激活受体2B抗体包装1g
肌动蛋白结合蛋白1抗体白介2(IL2)Orteronel(TAK-700) was selected as a candidate for clinical evaluation. orterone
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)白色链孢囊 [(1R)-(内型,反式)]-(+)-3-溴樟脑-8-磺酸铵盐EVA1;MPZL2
大肠埃希氏杆 4-水杨酸-5-磺酰E钙粘着蛋白;上皮性钙黏附蛋白
核盘(正确) 2-溴-3-丁基噻吩E选择
假肠膜明串珠 2-乙氧基吡啶FK506结合蛋白52
瓶孢青霉 5--2-羟基苯乙酮FMS样激3
劳地毛霉 BOC-L-焦乙酯G补缀FHA域血管生成因子1
酿酒酵母 3--2-氟溴苯G蛋白偶联受体32
糙孢蓝状 六氢邻苯二甲酰亚类缺陷病1型p24抗原
粉红粘帚霉 1-三苯基膦-2-酮HLA II类组织相容性抗原DQalpha1
巨大芽胞杆 顺式-1,2-环己二HLA-DPA1
杰丁塞伯林德纳氏酵母 1,4-二溴-2-氟苯HLA-DPB1
淡黄湿伞 2,4-二氟苯HLA-DR4抗原
Streptomyces setonensis Shomura (R)-(-)-甘油缩酮H-ras
单核增生李斯特氏 3,4,5-三氟苯酸IFN-γR1-CDw119
黑曲霉 代肟基乙酸乙酯II型胶原蛋白
































