Hoechst 33258染色液正在热销的产品：AcidL-GMediumBase
Legionella Combi-Pack 军团杆jun复合包 1.10425.0001 MERCK默克 incubation media Legionella Combi-Pack 军团杆jun复合包 1.10425.0001 MERCK默克
亚碲suan钾(庆大霉su琼脂冻干配套试剂) 2.5mg/支x10 每
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Hoechst 33258染色液
英文名称：
产品规格：1mL
货号：FS-X9671
产品介绍:
Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258的大激发波长为346nm，大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后，大激发波长为352nm，大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。 使用说明： 使用前用生理盐水或PBS将Hoechst 33258染色液稀释100倍，即为工作液。 1. 对于固定的细胞或组织： a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。 b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258工作液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的工作液，混匀。室温放置3-5分钟。 c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。 d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 2. 对于活细胞或组织： a. 加入适当量Hoechst 33258工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1mL工作液，对于96孔板一个孔需加入100μL工作液。 b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。 储存条件：-20℃避光，有效期一年。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
肿瘤相关抗原(TAA)elisa检测试剂盒 英文名称：TAA ELISA Kit，TAA，
脂质运载蛋白2(LCN2)elisa检测试剂盒 英文名称：LCN2 ELISA Kit，LCN2，
增殖诱导配体(APRIL)elisa检测试剂盒 英文名称：APRIL ELISA Kit，APRIL，
游离雌三chun(FE3)elisa检测试剂盒 英文名称：FE3 ELISA Kit，FE3，
乙酰(ACH)elisa检测试剂盒 英文名称：ACH ELISA Kit，ACH，
胰蛋白mei原激活肽(TAP)elisa检测试剂盒 英文名称：TAP ELISA Kit，TAP，
血小板性蛋白(PBP/CXCL7)elisa检测试剂盒 英文名称：PBP/CXCL7 ELISA Kit，PBP/CXCL7，
血管性血友病因子/瑞斯托霉su辅因子(VWF)elisa检测试剂盒 英文名称：VWF ELISA Kit，VWF，
Sestrin2蛋白(SESN2)elisa检测试剂盒 英文名称：SESN2 ELISA Kit，SESN2，
Penguin蛋白(PEN)elisa检测试剂盒 英文名称：PEN ELISA Kit，PEN，
Rhotekin2蛋白(RTKN2)elisa检测试剂盒 英文名称：RTKN2 ELISA Kit，RTKN2，
N-去乙酰化mei/磺基转移mei2(NDST2)elisa检测试剂盒 英文名称：NDST2 ELISA Kit，NDST2，
Nesprin2蛋白(Nesp2)elisa检测试剂盒 英文名称：Nesp2 ELISA Kit，Nesp2，
M2-型suan激mei(PKM2)elisa检测试剂盒 英文名称：PKM2 ELISA Kit，PKM2，
Intersectin1蛋白(ITSN1)elisa检测试剂盒 英文名称：ITSN1 ELISA Kit，ITSN1，
Genethonin1蛋白(GEN1)elisa检测试剂盒 英文名称：GEN1 ELISA Kit，GEN1，
D-多巴色su变位mei(DDT)elisa检测试剂盒 英文名称：DDT ELISA Kit，DDT，
Hoechst 33258染色液外消旋阿巴卡韦标准品 规格:20mg 英文名称：Abacavir Sulfate Racemic
双-乙基乙氧ben酚jia氧ben基三嗪标准品 规格:200mg 英文名称：Bemotrizinol
七jia基三硅氧烷标准品 规格:150mg 英文名称：Heptamethyl Trisiloxane
盐suan莫西沙星标准品 规格:200mg 英文名称：Moxifloxacin Hydrochloride
美索比妥标准品 规格:500mg 英文名称：Methohexital CIV
黄肉楠标准品 规格:20mg 英文名称：Actein
甘油山崳suan酯标准品 规格:200mg 英文名称：Glyceryl Behenate
沙丁anchun标准品 规格:200mg 英文名称：Albuterol
ben丙二chun标准品 规格:100mg 英文名称：Phenylpropanediol
癸氧喹酯标准品 规格:200mg 英文名称：Decoquinate
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
