培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)
英文名称:Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK
产品规格:20μl
货号:FS-X10223
产品介绍:
英文名称:Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK 产品规格:20μl 浓度:2mM in DMSO 分子式:C32H45FN4O12 分子量:696.7 纯度:≥95%(HPLC) 储存:-20℃,有效期12个月 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
假单胞菌热休克蛋白-60抗体Human SUMO2/3 大鼠还原(GR)免疫试剂盒
洋葱伯克霍尔德氏菌热休克蛋白-70抗体Human SUN1 大鼠过氧化物(GSH-PX)免疫试剂盒
不等弯孢热休克蛋白90α抗体Human SUOX 大鼠S转移θ1(GSTT1)免疫试剂盒
根瘤菌热休克蛋白90β/HSP90 β 抗体Human SYCE1 大鼠S转移P(GSTP1)免疫试剂盒
蔷薇放线孢*人巨病UL23抗体Human STT3A 大鼠S转移Mu1(GSTM1)免疫试剂盒
顶孢头孢霉HECA蛋白抗体Human SUPT16H 大鼠S转移(GSTs)免疫试剂盒
香菇异质核糖核蛋白hnRNPA2抗体Human STT3B 大鼠(GSH)免疫试剂盒
齐藤假丝酵母异质核糖核蛋白U抗体Human STXBP2 大鼠谷酰合成(GLUL)免疫试剂盒
巨大芽胞杆菌人类状瘤病16/18 E6抗体Human STXBP1(Syntaxin-binding protein 1) 大鼠谷酰(Gln)免疫试剂盒
木贼镰孢HA tag标签抗体Human STXBP3 大鼠谷脱羧自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)免疫试剂盒
克雷伯氏菌属荷尔蒙敏感脂肪抗体Human STXBP4 大鼠谷脱羧自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)免疫试剂盒
大肠菌群质控样品血红蛋白α1/α-Globin抗体Human IFI6(Interferon alpha-inducible protein 6) 大鼠谷脱羧1(GAD1)免疫试剂盒
德尔布有孢酵母Fas相互作用蛋白激2抗体Human STXBP5 大鼠谷脱氢(GDH/GLDH)免疫试剂盒
葡萄座腔菌Fas相互作用蛋白激3抗体Human STOML2(Stomatin-like protein 2) 大鼠谷免疫试剂盒
乳乳球菌乳亚种人类疱疹病8抗体Human STXBP6 大鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫试剂盒
根瘤菌磷化热休克蛋白27抗体Human SUFU 大鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira IgG)免疫试剂盒
传染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 质量规格:standard for GC,≥99.6%(GC)朝藿定A1
小单孢菌属Micromonospora│sp. 质量规格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)黄柏碱
盐栖盐田菌Salinicola│salarius 质量规格:standard for GC,≥99.0%(GC)京尼平
Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)薄黑孔 2-溴-1-(3-)乙酮谷脱羧65
酿酒酵母 2,3-二甲氧基苯谷脱羧67
酿酒酵母 3,5,6-三水杨多巴D2受体
平菇 3--2-丁酮tcf-4抗体
绳状青霉 二氟草锂谷氨酰酰肽环转移
浅黄隐球酵母 4-溴-3-盐盐蛋白质氧化羰基化
居真细 3-基-4-氟三氟甲苯泰泽病原体抗体
烬灰产色链霉 N-乙基-2-甲基弓形虫抗体
丛毛单胞 化N-辛基吡啶SYA674型四环
中国台湾根霉 (S)-(-)-alpha-(Boc-氨基)-gamma-丁内酯球蛋白G3亚型抗体
密歇根棍状杆标记亚种 磷甲型肝炎病抗体
大肠埃希 4-溴-3-氟苯甲音猬因子
板栗蛇孢日规壳 2-甲氧基吡啶-4-频哪酯谷氨酰
间型假丝酵母 4-甲基-5-羟基呋喃-2-酮磷肌3激
扩展青霉改名娄地青霉 5-甲基四氮唑Dectin-1蛋白
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)