细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | 大鼠心肌细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X0948 |
商品介绍:
名称 大鼠心肌细胞 2.组织来源:心脏组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠心肌细胞分离自心脏组织;心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官,主要功能是为血液流动提供压力,把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成,左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开,故互不相通,心房与心室之间有瓣膜(房室瓣),这些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动,向器官、组织提供充足的血流量,以供应氧和各种营养物质,并带走代谢的终产物(如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等),使细胞维持正常的代谢和功能。心肌细胞呈菱形、多边形等不规则形状;细胞培养2h后开始贴壁,呈梭形;到12h左右,细胞开始伸出伪足,呈菱形、多角形;细胞分离培养48h以后,大部分伸出伪足、呈巴掌状,部分心肌细胞会出现搏动;心肌细胞为终末分化细胞,在体外不增殖。体外培养的心肌细胞可保持结构及功能上的某些特点,并具有自发性节律搏动,且心肌细胞的培养具有简便、定量、重复性好以及不受神经体液因素的影响等特点。利用培养的心肌细胞在探索非血液动力学因素所致的心肌肥厚的调节,研究心肌细胞的生物力学、凋亡、受体下调、缺血预处理、信号通路、对作用于心脏的新药进行筛选并对其安全性进行评价以及从培养的心肌细胞中提取有价值的生物因子等方面具有广阔的应用前景,对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠心肌细胞采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法,并用化学试剂抑制法筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠心肌细胞经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件PLL(0.1mg/ml) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R073 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
250μg 淀粉样 β- 蛋白片段 25-35 Amyloid β-Protein Fragment 25-35 -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人含P8和FADD样凋亡调节因子(CFLAR)ELISA试剂盒
抗生素检定培养基7号 Antibiotic Agar NO.7 250g 0.78-50 ng/mL 人细胞结合蛋白2(CRABP2)ELISA试剂盒
1mL Protein A磁珠 0.312-20 ng/ml 人层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒
2 ug pTK-
大鼠心肌细胞10000mU 三腺苷双 Apyrase -20℃保存
Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.1ml
phgophs-ATG4C(Ser398) 磷酸化自噬相关蛋白4C抗体 规格: 0.1mlDRIP1/C14orf28 多巴胺受体相互作用蛋白1抗体 规格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/AP 碱性磷酸(AP)标记的羊抗鸡IgG 规格: 0.1ml
CHRNA3/AChRα3 碱型乙酰受体α3抗体 规格: 0.2ml
CDK2 周期素依赖性激2抗体 规格: 0.1ml
Donkey Anti-Goat IgG 驴抗羊IgG 规格: 1mg
Phospho-MKK3(Ser189)/MKK6(Ser207) 磷酸化丝裂原活化蛋白激MKK3/6抗体 规格: 0.1mlMARCH11 膜相关环指蛋白11抗体 规格: 0.2ml
LACE1 泌升高蛋白1抗体 规格: 0.2mlBAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2 脑特异性管生成抑制蛋白2抗体 规格: 0.2ml
Annexin A9 膜粘连蛋白9抗体 规格: 0.2ml
SASS6 纺锤体组装异常蛋白6抗体 规格: 0.2ml
1瓶 LL/2(LLC1)细胞株 LL/2(LLC1) 低温运输和保存