乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣红法)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10131

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣红法)

英文名称：

产品规格：3×50ml

货号：FS-X10131

产品介绍:

用途：

乙肝病毒/HBV染色

注意事项：

特异性高，但染色效果易受原料影响，不稳定。HBsAg阳性物质呈棕红至深棕色，背景呈浅淡灰棕色肝细胞核不着色。肝细胞内脂褐素也呈深棕色。

储存条件：4℃，避光，12个月

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

枯草芽孢杆菌枯草亚种磷化表皮生长因子受体抗体Human PGR(Progesterone receptor) 犬促肾上腺皮质激(ACTH)免疫试剂盒

木耳Au888磷化表皮生长因子受体抗体Human FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein) 犬促肾上皮质激释放激(CRH)免疫试剂盒

彩色豆马勃磷化表皮生长因子受体抗体Human FSIP1 (Fibrous sheath-interacting protein 1) 犬促卵泡(FSH)免疫试剂盒

暗拟茎点霉*磷化表皮生长因子受体抗体Human ARSD(Arylsulfatase D) 犬促甲状腺(TSH)免疫试剂盒

黑曲霉磷化表皮生长因子受体抗体Human EVX1 (Homeobox even-skipped homolog protein 1) 犬雌激(E)免疫试剂盒

围小丛壳菌磷化表皮生长因子受体抗体Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬雌二(E2)免疫试剂盒

球孢白僵菌磷化表皮生长因子受体抗体Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬成纤维生长因子23(FGF23)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌磷化表皮生长因子受体抗体Human FCHSD2 (F-BAR and double SH3 domains protein 2) 犬不对称二甲基精(ADMA)免疫试剂盒

青霉属磷化表皮生长因子受体抗体Human SLC30A3(Zinc transporter 3) 犬表面活性蛋白D(SP-D)免疫试剂盒

耐碱马赛菌磷化表皮生长因子受体抗体Human EWSR1 (RNA-binding protein EWS) 犬表达于SiSo系的受体结合型肿瘤抗原(EBAG9)免疫试剂盒

炭黑曲霉磷化表皮生长因子受体抗体Human FCHO1 (F-BAR domain only protein 1) 犬半胱蛋白抑制剂/胱抑C(Cys-C)免疫试剂盒

黑附球菌磷化表皮生长因子受体抗体Human EXO5 (Exonuclease V) 犬白介8(IL-8/CXCL8)免疫试剂盒

八孢裂殖酵母磷化表皮生长因子受体抗体Human EXTL1 (Exostosin-like 1) 犬白介7受体(IL7R)免疫试剂盒

弗雷德里克斯堡假单胞菌磷化转录接头蛋白EP300抗体Human FCHO2 (F-BAR domain only protein 2) 犬白介6(IL-6)免疫试剂盒

小奥德蘑磷化转录因子ELK1抗体Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬白介4(IL-4)免疫试剂盒

三骨菇磷化转录因子ELK1抗体Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬白介2(IL-2)免疫试剂盒

刺孢小克银汉霉原变种Cunninghamella│echinulata var. echinulata 质量规格：分析标准品对羟基

淡紫拟青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 质量规格：0.100mg/ml对羟基

竹喙球菌Ceratosphaeria│phyllostachydis Zhang 质量规格：分析标准品,95%
乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣红法)枯草芽孢杆 2-苄基烯E3泛连接

汉逊德巴利酵母 5-氨基-2-嘧啶香豆-3-羟化

芽孢杆苄氧羰基-羟基甘5-氨基酮戊脱水

毛栓孔 4--2-氟苄5-氨基酮戊

贝伦格葡萄座腔梨生专化型 2,4-二氟苄尿卟啉原

滑菇 4,4'-(1,2-二乙基亚乙基)二尿卟啉原合

产黄青霉 1-(4-羟丁基)-4-甲基哌单氧化B

蜡样芽孢杆 2-(叔-丁基)苯基异酯腐N-甲基转移

弯孢 2-哌酮20S蛋白体

云芝 1-苄基-4-基-4-苯基盐盐α-L-岩藻糖

短杆顺式-4-氨基环己盐盐抗坏血过氧化物

Cystofilobasidium 二盐基性硬脂铅β-1,3-葡聚糖

致病拟杆头孢色P4503A4

粪肠球 2,4-二氨基-6-羟基嘧啶羟甲基戊二单酰

枯草芽孢杆 5,6-二烟甲酯葡萄糖
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)