玉米内源基因核酸检测试剂盒 返回列表页

PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
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参数规格：
产品名称：玉米内源基因核酸检测试剂盒
产品规格：48T  0.1PCR管
产品货号：FS-P10750
产品分类：荧光探针法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
欧文斯氏弧菌培养基: 471南大西洋细菌沉积物/深海沉积物提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 25℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

美极梅奇酵母生长条件: 25℃培养基: 0013提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

嗜中温海旋菌污染物降解微生物/潜在石油烃类降解菌模式菌株: no水样/表层海水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 821生长条件: 25℃

 -1554℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

AS1.217细菌肥料模式菌株: no种属: Bacillus│megaterium提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0002生长条件: 30℃

木霉培养基: 14木霉系统学研究朽木桩提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 25 定期移植法

苏云金芽孢杆菌培养基: 266模式菌株: noGrain提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法

ATCCSC-4121FD=NRRL3238发酵pentostatin模式菌株: no种属: Streptomyces│antibioticus FD. viais提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0012生长条件: 28C

矩圆黑盘孢培养基: 14模式菌株: no枝干病斑提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25-27 定期移植法

蛹虫草生长条件: 25培养基: 14提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no 定期移植法

 -1555℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

ATCC35960=CGMCC1.2149=DSM4425=NCIMB13115模式菌株: yes安全等级: 1种属: Haloferax│denitrificansSaltern提供形式: 冻干物模式菌株培养基: 0212

植物乳杆菌发酵面制品。模式菌株: no面团提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0006生长条件: 30℃

巴氏醋杆菌培养基: CM0745酿造食醋。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 30℃ 真空冷冻干燥法；定期移植法

糙皮侧耳(平菇)培养基: 0014食用、药用提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 25℃ 液氮超低温冻结法；矿物油法；定期移植法

氧化微杆菌培养基: 1003生物活性微生物/潜在的抗肿瘤活性沉积物/深海沉积物提供形式: 冻干物模式菌株: no生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

花椒素Iba-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1)  离子钙接头蛋白抗原TRIP  肿瘤坏死因子受体相互作用蛋白抗体

白花前胡IFABP(Intestinal Fatty acid binding protein)  小肠型脂肪结合蛋白抗原Triosephosphate isomerase  磷糖异构酶抗体

佛手柑内酯，香柑内酯，5-甲氧基补骨脂素IFITM1 (interferon induced transmembrane protein 1)  干扰素诱导跨膜蛋白1抗原TRIM7/RNF90  糖原生成素相互作用蛋白抗体

左旋肉碱human IFN- Alpha (Interferon Alpha )  干扰素-α抗原（人）TRIM6/RNF89  环指蛋白89

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷；花青素IFNGR1/CD119 peptide  干扰素-gamma受体1抗原TRIM5α/RNF88  环指蛋白88抗体

矢车菊素：花青素IGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2)  胰岛素样生长因子结合蛋白-2（多肽）TRIM50  TRIM50蛋白抗体

5-羟色胺5-HTPIGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term  胰岛素样生长因子结合蛋白-3抗原TRIM47  星形瘤高表达蛋白抗体（环指蛋白100）

亥茅酚苷IGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3)  胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗原TRIM41  环指蛋白调节蛋白激酶C蛋白抗体

异鼠李素-3-O-新橙皮苷IKB Beta (Inhibitor of KB)  KB抑制蛋白β(多肽)TRIM36/RNF98  环指蛋白98抗体

紫蓳灵; 紫堇灵碱IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha)  KB抑制蛋白α抗原TRIM35  TRIM35蛋白抗体
玉米内源基因核酸检测试剂盒Loxoprofensodium　洛索洛芬钠(标准品)　质量规格：>98%,BC

Paeonol　丹皮酚　质量规格：>98%,BC

Paeonol　丹皮酚(标准品)　质量规格：>98%,BC

Rotundine/L-Tetrahydropalmatine　罗通定/左旋延胡索乙素/左旋四氢巴马汀　质量规格：>98%,BC

Liranaftate　利拉萘酯　质量规格：>98%,BC

Liranaftate　利拉萘酯(标准品)　质量规格：>98%,BC

Naproxensodium　萘普生钠　质量规格：>98%,BC

Naproxensodium　萘普生钠（标准品）　质量规格：>98%,BC

Zidovudine　齐多夫定　质量规格：>98%,BC

Zidovudine　齐多夫定（标准品）　质量规格：>98%,BC

Nicorandil　尼可地尔　质量规格：>98%,BC

Nicorandil　尼可地尔（标准品）　质量规格：>98%,BC

Nicotinicacid　烟　质量规格：>98%,BC

Rifampicin　利福平；利发霉素　质量规格：>98%,BC

Rifampicin　利福平(标准品)　质量规格：>98%,BC