Cry3A基因核酸检测试剂盒 返回列表页

参数规格：
产品名称：Cry3A基因核酸检测试剂盒
产品规格：48T   0.1PCR管
产品货号：FS-P10714
产品分类：荧光探针法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
LMG24842T=CCTCCAB208315T=MCCC1A04137模式菌株: yes安全等级: 1种属: Arenibacter│nanhaiticus沉积物/表层沉积物提供形式: 冻干物模式菌株；培养基: 471

大肠埃希菌用于科研模式菌株: no病料提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 335生长条件: 37

金霉素链霉菌抗异亮氨变种培养基: CM0012产生Luteomycin藤黄霉素提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28C 真空冷冻干燥

地衣芽孢杆菌培养基: 2模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 50℃ -80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法

 -1465℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

葡萄汁酵母广柑酒酿造。模式菌株: no广柑果提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0077生长条件: 28-30℃

伪狂犬病病教学研究模式菌株: no病猪提供形式: 冻结物安全等级: 2培养基: 0生长条件: 37

相思根瘤菌培养基: 63模式菌株: no根瘤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28-30 定期移植法

酿酒酵母培养基: CM0077酿造葡萄酒提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法

胞内分枝杆菌鸟-胞内分枝杆菌分离株血清定型模式菌株: no病料提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 61生长条件: 37

AS2.1182饲料。模式菌株: no种属: Issatchenkia│orientalis提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0077生长条件: 28℃

 -1466℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

 ACCC11093、IFFI6017培养基: 56用于制奶种属: Streptococcuslactis(Lister)Lohnis安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 30℃

猪丹丝菌定性血清模式菌株: no鱼提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 396生长条件: 37

短小芽孢杆菌红麻脱胶，24小时红麻脱胶程度为5模式菌株: no沤麻水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0081生长条件: 34℃

酿酒酵母培养基: CM0077发酵制黄酒。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法

大黄BRCA1  乳腺癌易感基因1抗原 脑肠肽（一种新的生长激素释放肽）IgG

大黄素PSD-95   突触后密度蛋白95（抗原） 生长激素释放激素因IgG

大黄素甲BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)  乳腺癌易感基因2抗原 碱性磷酶标记鼠抗人甲胎蛋白单克隆

大黄酚PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )  蛋白酪氨磷酶-1B（抗原） 胃泌素抑制肽IgG

芦荟大黄素RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)  维甲受体-α 多肽 糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体IgG

杨梅素glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]  风疹病糖蛋白多肽片段 DNA结合抑制因子2IgG

二氢杨梅素SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide  突触相关蛋白-1（多肽抗原） 抗眼镜蛇蛇蛋白（眼镜蛇）IgG

标准品SARS S-protein(抗原)  γ-taxilin/LSR5  脂多糖相关反应蛋白5抗体

阿魏SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原)  γ-Catenin  γ-连环素/连接蛋白γ抗体

白藜芦亚型全病抗原  H5N1-H5β-synuclein/SNCB  核突触蛋白β抗体
Cry3A基因核酸检测试剂盒Amoxicillin　阿莫西林/羟氨苄青霉素　质量规格：>95.0%(GC)

Amoxicillin　阿莫西林（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Fenofibrate　非诺贝特　质量规格：>95.0%(GC)

Fenofibrate　非诺贝特（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Probenecid　丙磺舒　质量规格：>95.0%(GC)

Probenecid　丙磺舒（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Norfloxacin　诺氟沙星　质量规格：>95.0%(GC)

Norfloxacin　诺氟沙星（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

NorfloxacinHCl　诺氟沙星盐盐　质量规格：>95.0%(GC)

NorfloxacinHCl　诺氟沙星盐盐（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Indometacin　吲哚美辛　质量规格：>95.0%(GC)

Indometacin　吲哚美辛（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Cimetidine　西米替汀　质量规格：>95.0%(GC)

Cimetidine　西米替汀（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Adefovirdipivoxil　阿德福韦/阿德福韦酯　质量规格：>95.0%(GC)
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。