GOX基因核酸检测试剂盒 返回列表页

PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
​
参数规格：
产品名称：GOX基因核酸检测试剂盒
产品规格：48T   0.1PCR管
产品货号：FS-P10713
产品分类：荧光探针法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
鼠李糖短状杆菌潜在石油烃类降解菌/生物活性物质筛选模式菌株: no水样/近海海水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 471生长条件: 28℃

小单孢菌属抑制弹性蛋白酶的活力模式菌株: no海底土提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0012生长条件: 35-37C

青霉属活性物质；抗凝血模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0018生长条件: 28C

大肠埃希菌研究模式菌株: no病料提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 335生长条件: 37

膜蹼毕赤酵母生长条件: 25-30℃培养基: 13温泉泥提供形式: 斜面培养物模式菌株: no 真空冷冻干燥法

 F521用酒类和食品颜色（桔红）。模式菌株: no种属: Monascus│anka提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0013生长条件: 30℃

 -1463℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

茄链格孢（番茄早疫病菌）教学科研模式菌株: no形态: 菌丝体全部埋生或部分表身生。菌丝无色至褐色。很少形成子座，无刚毛及附属枝。分生孢子梗淡褐色至褐色，单枝或不规则分枝，短或长，弯曲或呈屈膝状。产孢孔出式产孢，合轴式延伸或不再延伸，孢痕明显。分生孢子呈链状或单生，淡褐色至深褐色，形状不一，表面光滑或具微刺，有纵横隔膜，顶端常具喙。菌丝有隔膜和分枝，较老的颜色较深。分生孢子梗直立或稍弯曲，色深而短，单生或丛生，有1-7个隔膜，大小为50-90um ×6-9um.分生孢子自分生抱子梗顶端产生，通常单生，其形状差异很大，倒棍棒形至长椭圆形，颜色为淡金黄色至榄褐色，具长嚎，表面光滑，9-11个横隔膜，0到数个纵隔膜，大小为117-154um ×9.8-15.7um,嚎长等于或长于孢身，有时有分枝，嚎宽2. 5-5um。番茄叶片安全等级: 1培养基: 0014生长条件: 25-28℃

 AS4.68培养基: 14模式菌株: no种属: Streptomyces│globisporus var.flavus提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ 真空冷冻干燥法

黑曲霉培养基: CM0015糖化酶菌。提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 定期移植法；其他

黄色短杆菌培养基: CM0048L-缬氨提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 32℃ 真空冷冻干燥法；定期移植法

野野村氏菌属菌种抗大肠杆菌模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0027生长条件: 28C

 1(1),9,12　a　1,5模式菌株: no种属: Salmonella│sendai提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: CM0051生长条件: 37℃

 -1464℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

马流产沙门氏菌科研及血清定型模式菌株: no公马死后脓汁提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 335生长条件: 37

沙福芽孢杆菌培养基: 821潜在的有机污染物降解菌/分离自石油富集菌群沉积物/TVMC沉积物/TVMC沉积物/TVMC沉积物(31-35cm)提供形式: 冻干物模式菌株: no生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

柴胡皂苷BPP-1  蛋白磷酯酶-1（抗原） 粒-巨噬克隆刺激因子IgG

橙皮素BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)  骨成型蛋白受体1A抗原 绿色荧光蛋白IgG

穿心莲内酯PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)  D型-过氧化酶活化增生受体(多肽） 绿色荧光蛋白IgG

甘草PP-2A (protein phosphatase 2A)  蛋白质磷酶-2A（抗原） 兔抗绿色荧光蛋白IgG

甘草次BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)  B特异性转录因子抗原 生物素化兔抗人纤维蛋白原

甘草单铵盐;甘草铵PP-2B alpha 1   蛋白磷酯酶-2B 催化亚单位（抗原） GDNF家族受体α-1IgG

标准品PR (Progestogerone receptor)  孕激素受体（抗原）抗体

甘草苷PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)  早老素蛋白-1（抗原） GDNF家族受体α-4IgG

异甘草苷PS-1，Presennillin-1(CT)  早老素蛋白-1（S182） 生物素标记兔抗三聚胺IgG

甘草素/甘草BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)  乳腺癌易感基因1抗原(小鼠 大鼠) 生长激素受体IgG
GOX基因核酸检测试剂盒Cefoxitinsodium　头孢西丁钠　质量规格：>95.0%(GC)

Cefoxitinsodium　头孢西丁钠（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Valsartan　缬沙坦　质量规格：>95.0%(GC)

Valsartan　缬沙坦（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Glipizide　格列吡嗪　质量规格：>95.0%(GC)

Glipizide　格列吡嗪（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

DonepezilHCl　盐多奈哌齐I型　质量规格：>95.0%(GC)

Estrone　雌酚/雌　质量规格：>95.0%(GC)

Estrone　雌酚/雌（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

ClindamycinHCl　盐克林霉素　质量规格：>95.0%(GC)

ClindamycinHCl　盐克林霉素(标准品)　质量规格：>95.0%(GC)

VerapamilHCl　盐维拉帕米　质量规格：>95.0%(GC)

VerapamilHCl　盐维拉帕米（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)

Mycophenolicacid　霉酚;麦考酚;MPA　质量规格：>95.0%(GC)

Mycophenolicacid　霉酚;麦考酚（标准品）　质量规格：>95.0%(GC)