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当前位置：上海抚生实业有限公司>>细胞生物学试剂>>细胞组织染色>> 钙黄绿素AM
| 货号 | FS-X9823 |
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中文名称：钙黄绿素AM
英文名称：Calcein,AM
产品规格：10μg
货号：FS-X9823
产品介绍:
钙黄绿素AM，是一种应用广泛的绿色荧光细胞标记物。钙黄绿素AM具有膜透性，共孵育时可以传过细胞，其本身不具有荧光信号，但在胞内被酯酶水解后，生成具有荧光信号的钙黄绿素。 在健康的活细胞细胞质中，钙黄绿素可以保持高负电荷状态。由于其对细胞的毒性小，钙黄绿素AM 已经被广泛用于研究细胞膜的完整性和长期示踪观察以及活细胞计数。 ：148504-34-1 分子式：C46H46N2O23 分子量：994.86 储存：-20℃，避光，有效期12个月 |
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
D-二聚体(D2D)英文名：D2D 原癌蛋白CBL2抗体包装5g
D-多巴色变位(DDT)英文名：DDT 信号调节蛋白α抗体包装1g
DNA修复蛋白RAD50(RAD50)英文名：RAD50 信号淋巴活化分子CD150抗体包装5g
DNA损伤诱导转录因子3(DDIT3)英文名：DDIT3 巨噬炎性蛋白16抗体包装10g
DNAⅠ样蛋白3(DNASE1L3)英文名：DNASE1L3 果蝇CG6856-PA抗体包装5g
DNA基转移3B(DNMT3B)英文名：DNMT3B 色c氧化COX7A2抗体包装1g
DNA基转移1(DNMT1)英文名：DNMT1 剪切和多聚腺化特异性因子4抗体包装25g
DNA激活蛋白激催化亚基肽(PRKDC)英文名：PRKDC 组织蛋白E抗体包装5g
Discs大同源物4(DLG4)英文名：DLG4 紧密连接蛋白5抗体包装25g
Discoidin域受体家族成员1(DDR1)英文名：DDR1 分化周期CDC42相互作用蛋白4抗体包装5g
Dickkopf相关蛋白4(DKK4)英文名：DKK4 周期蛋白依赖性激样3抗体包装100ml
Dickkopf相关蛋白1(DKK1)英文名：DKK1 杀菌肽/天蚕抗菌肽单克抗体包装25ml
C组着色性干皮病偶联因子(XPC)英文名：XPC 第十七号染色体开放阅读框87抗体包装1g
C-型钠尿肽(CNP)英文名：CNP 降钙受体抗体包装25g
C-肽(C-Peptide)英文名：C-Peptide 补体C2a链多肽抗体包装5g
蜡样芽孢杆菌Bacillus│cereus 质量规格：purity>97%,BR乙型肝炎病e抗原试剂盒野鹫尾;Lridin
: ivcas7.00265资源名称: 球形赖芽孢杆菌 质量规格：>98%,单醋盐乙型肝炎病e抗体试剂盒芫花;Genkwanin
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 质量规格：>99.0%,BR乙型肝炎表面抗原试剂盒3－乙酰基乳香 ;alpha-bosw
钙黄绿素AM樟疫霉 4--3,5-二氟载脂蛋白A5
拟康宁木霉 3-溴-6,9-二苯基-9H-咔唑烟酰
拟青霉 3-氨基-N-CBZ-吡咯烷盐盐结核杆IgM抗体
嗜麦芽寡养单胞 Cbz-1-氨基-1-环基线粒体呼吸链复合物I
盖氏海杆状 5-溴乙酰基-2-羟基苯甲N-甲基-D-天门冬（NMDA）受体A1亚单位NR4
帚状曲霉 7-基啉15脂加氧1
大肠埃希 2-氨基-3-氟苯蓝氏贾第鞭毛虫
粘孢白僵 DL-脯氨酰盐盐β-乳球蛋白
黄曲霉 [1,3-双(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亚基][(苯硫基)亚甲基](三环己基膦)二化钌酪蛋白
棒形青霉 N,N-双叔丁氧羰基-N-烯血吸虫
枯草芽孢杆 2-异基-4,5-二甲基-1H-咪唑蓝氏贾第虫
地衣芽胞杆 1-Boc-4-溴-1H-吡唑痢疾阿米巴
三线镰孢 Boc-D-2,4-二苯包虫病
爪哇根霉 磺达肝癸钠隐孢子虫
巨大芽孢杆 A 7-溴-1，2，3，4-四氢喹啉盐丝虫
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