抗酸染色液(Kinyoun冷染法)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10118

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：抗酸染色液(Kinyoun冷染法)

英文名称：

产品规格：3×50ml|3×100ml

货号：FS-X10118

产品介绍:

用途：

抗酸菌(结核杆菌等)染色，可鉴别抗酸菌与非抗酸菌

注意事项：

抗酸菌染色中leagene公司推荐采用该染色液。经典抗酸菌染色法，结果为：抗酸杆菌/结核杆菌呈红色，非抗酸杆菌和背景呈蓝色。主要由复红液、脱色液组成。

储存条件：室温，避光，12个月

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

金黄亚种酪蛋白激受体A10抗体Human LCP1 (Plastin-2) 人5羟二十碳四烯(5-HETE)免疫试剂盒

肠膜明串珠菌肠道病71型/手足口病病抗体Human LIG1 (DNA ligase 1) 人5核(5-NT)免疫试剂盒

假单胞菌转录因子ELF1抗体Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) 人5'-AMP活化蛋白激α-2催化亚基(PRKAA2)免疫试剂盒

大肠埃希氏菌酪蛋白激B3抗体Human SEMG2(Semenogelin-2) 人Ⅳ型前胶原基末端肽(PⅣNP)免疫试剂盒

鸭疫里氏杆菌磷化酪蛋白激受体B1+B2抗体Human POMC(Pro-opiomelanocortin) 人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)免疫试剂盒

农球菌酪蛋白激受体B1+B2+B3+B4抗体Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) 人4-羟基壬烯(HNE)免疫试剂盒

溶杆菌空通气孔样蛋白2抗体Human KMO(Kynurenine 3-monooxygenase) 人40S核糖体蛋白S19(RPS19)免疫试剂盒

微白黄链霉菌同源盒蛋白转录因子EN2抗体Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) 人Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)免疫试剂盒

粪肠球菌磷化外信号调节激5抗体Human LRRK1 (Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1) 人Ⅲ型前胶原基末端肽(PⅢNP)免疫试剂盒

平菇CD39样蛋白1抗体Human LCT (Lactase-phlorizin hydrolase) 人Ⅲ型前胶原基端肽(PⅢNT)免疫试剂盒

链霉菌真核翻译起始因子5抗体Human LRGUK (Leucine-rich repeat and guanylate kinase domain-containing protein) 人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)免疫试剂盒

大丽轮枝霉早期B淋巴因子2抗体Human LACE1 (Lactation elevated protein 1) 人Ⅲ型前胶原(HPCⅢ)免疫试剂盒

鲁氏接合酵母ELAVL2蛋白抗体Human TFCP2(Alpha-globin transcription factor CP2) 人Ⅲ型胶原蛋白(COL Ⅲ)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌ELAVL2+ELAVL4蛋白抗体Human IPP (Actin-binding protein IPP) 人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)免疫试剂盒

白鲍鱼菇同源盒蛋白转录因子EN1抗体Human LBX1 (Transcription factor LBX1) 人3氧代5α类固4脱氢2(SRD5A2)免疫试剂盒

曲霉转录因子ER81蛋白抗体Human PTN(Pleiotrophin) 人3型1-磷鞘受体(S1P3)免疫试剂盒

: ATCC10231资源名称: 白色假丝酵母质量规格：分析标准品琥珀

: FRI2008042资源名称: 嗜虫沙菌质量规格：分析标准品三油甘油酯

泡囊侧耳Pleurotus│cystidiosus 质量规格：≥98.0%(HPLC),分析标准品乙酰杨
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)pHY300PLK 2-(5-溴吡啶-2-基）2-甲基羧酯

Enterobacter cowanii 4-溴-2,5-二氟乙酰酯

大豆慢生根瘤环己烷频那酯神经酰合

酿酒酵母 3,5-二氟-4-甲酰基苯基鞘氨激

白蘑 3-[[5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己基]氧]-1,2-β-羟基丁

大肠埃希 2-异氧基-5-溴吡啶几丁质8受体激

缺陷短波单胞 7-氨基-4-羟基-2-萘磺麦豆球蛋白

沙雷氏 2-苯频那酯高分子量清蛋白

银耳、白木耳（可订购） 4-(苄氧基)苯-1-磺酰麦溶蛋白

产气肠杆 4,7-二喹啉羟基自由基

小串链霉 6--5-硝基喹啉柠檬

破伤风试验 2-溴-5-三氟甲基苄镁原卟啉Ⅸ

酿酒酵母 (S)-N-苄氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-5-氨基乙酰

印度农霉 5-疏基-1-苯基-四氮唑唾液

塔宾曲霉 TFA-aa-U醌氧化还原4
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)