实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：水稻内标准SPS基因PCR试剂盒
货号:CP96901
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
以下是水稻内标准SPS基因PCR试剂盒公司正在热销的产品：
Human STH(Saitohin) ELISA Kit资源名称费氏志贺氏菌种属:Shigella flexneri提供形式:冻干粉
Human SERPINA7(Thyroxine-binding globulin) ELISA Kit资源名称大豆根瘤菌种属:Bradyrhizobiumjaponicum(Kirchner)Jordan提供形式:冻干粉
Human BIRC6(Baculoviral IAP repeat-containing protein 6) ELISA Kit资源名称冰核细菌种属:INAbacteria安全等级:1
Human SLC2A13(Proton myo-inositol cotransporter) ELISA Kit资源名称阴沟肠杆菌种属:Escherichia cloacae提供形式:冻干粉
Human SLC12A1(Solute carrier family 12 member 1) ELISA Kit资源名称产气肠杆菌种属:Enterobacter aerogenes分离基物:痰液
Human DEFB4A(Beta-defensin 4A) ELISA Kit资源名称荧光假单胞菌种属:Pseudomonas fluorescens Migula提供形式:冻干粉
Human SLC8A1(Sodium/calcium exchanger 1) ELISA Kit资源名称南方树舌种属:Ganoderma│australe (Fr.) Pat.分离基物:子实体
Human SLC11A2(Natural resistance-associated macrophage protein 2) ELISA Kit资源名称木层孔菌种属:Phellinussp.安全等级:1
Human SLC25A12(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1) ELISA Kit资源名称平盖灵芝（树舌）种属:Ganodermaapplanatum(Pers.exWullr)Pat.安全等级:1
Human SLC25A13(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar2) ELISA Kit资源名称冬虫夏草种属:Ophiocordyceps│sinensis分离基物:冬虫夏草
Human SLC30A8(Zinc transporter 8) ELISA Kit资源名称虫草种属:Cordycepssp.安全等级:1
Human UBAP2(Ubiquitin-associated protein 2) ELISA Kit资源名称卧孔菌种属:Poriasp.安全等级:1
Human CDC42(Cell division control protein 42 homolog) ELISA Kit资源名称蜜粘褶菌=革裥菌种属:Gloeophyllumtrabeum(Pers.)Murr.=Lenzitestrabea(Pers.)Fr.安全等级:1
Human FSCN2(Fascin-2) ELISA Kit资源名称鸡腿蘑（毛头鬼伞）种属:Coprinuscomatus(Mull.exFr.)Gray安全等级:1
Human REG3γ(RegeneRating Islet Derived Protein 3 Gamma) ELISA Kit资源名称金针菇种属:Flammulina│velutipes提供形式:斜面培养物
Human S1PR2(Sphingosine 1-phosphate receptor 2) ELISA Kit资源名称珊瑚色诺卡氏菌种属:Nocardia coralline提供形式:冻干物
Human S1PR3(Sphingosine 1-phosphate receptor 3) ELISA Kit资源名称蛎灰链霉菌种属:Streptomycessp.安全等级:1
Human S1PR4(Sphingosine 1-phosphate receptor 4) ELISA Kit资源名称淡天蓝色链霉菌种属:Streptomycescoelicolor(Preobrazhenskaya)Pridham.HesseltineetBenedict安全等级:1
Human S1PR5(Sphingosine 1-phosphate receptor 5) ELISA Kit资源名称抗生链霉菌种属:Streptomyces antibioticus (Waksman et Woodruff) Waksman et Henrici提供形式:冻干粉
Human IL31RA(Interleukin-31 receptor subunit alpha) ELISA Kit资源名称大丽花轮枝孢种属:Verticillium│dahliae分离基物:棉花
水稻内标准SPS基因PCR试剂盒ANGPTL4(Angiopoietin Like Protein 4)|ARP4|FIAF|HFARP|NL2|PGAR|pp1158过氧化氢酶试剂产品规格：10支/盒
AZU1(Azurocidin 1)|AZAMP|AZU1|CAP37|HBP|AZAMP|AZU|azurocidin|azurocidin 1|Azurocidin|Cationic Antimicrobial Protein-37|Heparin Binding Protein胆汁液态培养基用途：胆汁液态培养基用于饮用天然矿泉水中粪链球菌滤膜法的确证实验。(GB/T8538-2008)原理：
BAFF|CD257|TNFSF13B|BLYS|TALL1|THANK|TNFSF20|ZTNF4脑-心浸萃琼脂培养基用途：脑-心浸萃琼脂培养基广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验(GB/T8538-2008和CJ/T148-2001)。原理：
BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor)|ANON2|BULN2|Abrineurin|neurotrophin脑-心浸萃液态培养基用途：脑-心浸萃液态培养基广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于饮用天然矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验(GB/T8538-2008，SN/T2206.4-2009和CJ/T148-2001)。原理：
BTC(Betacellulin)|bTCKF链球菌琼脂培养基用途：KF链球菌琼脂培养基用于粪性链球菌滤膜法选择性培养和计数(GB/T8538-2008，SN/T2206.5-2009和CJ/T148-2001)。原理：
BMP-2(Bone Morphogenetic Protein 2)|BMP2A|BMP-2A乳糖蛋白胨培养液用途：乳糖蛋白胨培养液用于水中多管发酵法或滤膜法测定大肠菌群(GB/T5750.12-2006和GB/T8538-2008)。原理：
BMP-4|BMP2B|BMP2B1|MCOPS6|ZYME|DVR4|OFC11|ZYME亮绿乳糖培养液(BGB)用途：亮绿乳糖培养液(BGB)用于多管发酵法测定饮用矿泉水中大肠菌群的确证试验(GB/T8538-2008)。原理：
BMP-5(Bone Morphogenetic Protein 5)品红亚硫酸钠培养基(远藤琼脂培养基)用途：品红亚硫酸钠培养基(远藤琼脂培养基)用于水中大肠菌群的分离或确证试验。(GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。原理：
