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亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒100T免费代测实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒100T免费代测注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
NCI-H716(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
颌下腺上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
EDAR Others Cynomolgus 食蟹猴 EDAR 人细胞裂解液 (阳性对照)
P3HR1细胞,人EBV阳性B淋巴瘤细胞 大鼠胰腺癌细胞株,DSL-6A/C1细胞 人小脑星形胶质细胞cDNAHA-c cDNA
中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 Ig-24
CoC1(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷细胞)5×106cells/瓶×2 大鼠气管上皮细胞;RTE
犬肾细胞;MDCK/IgR
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人细胞裂解液 (阳性对照)
人前列腺上皮细胞*培养基 100mL
A673细胞,人横纹癌细胞 肺炎链球菌 615小鼠状肺腺癌瘤株;P615
CCL16 Protein Human 重组人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 标签)
MA-782(小鼠癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照)
NCSTN Others Mouse 小鼠 Nicastrin / NCSTN 人细胞裂解液 (阳性对照)
人胚胎气管组织来源细胞;CCC-HBE-2
人膀胱成纤维细胞*培养基 100mL
C6细胞,大鼠神经胶质瘤细胞 cv-1(非洲绿猴肾细胞) 人癌细胞;MCF 7B
IL8 Protein Human 重组人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77)
SMMC-7721(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠CD320分子(CD320)ELISA试剂盒 ,英文名: CD320 ELISA Kit
人脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA检测试剂盒Humandeoxypyridinoline,DPDELISAKit 96T/48T
大鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)免疫试剂盒 Rat Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH ELISA kit
CLIAKitforVCL(Humanvinculin)ELISAKit人纽蛋白规格:48T/96T
免疫组化AP-BCIP/NBT底物显色试剂盒50次
ELISAKitPGAM2人磷酸甘油酸变位酶2规格:48T/96T
兔子基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human thymosin alpha 1 (Thymosin alpha 1) ELISA Kit 人*α1(Thymosin α1)ELISA试剂盒
Human28SribosomeRNPantibody,28SrRNPELISAKit 人28S抗核糖体抗体(28SrRNP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember1,EAR1ELISA试剂盒人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员1(EAR1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织PKD2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit人对氨基苯甲酸(PABA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒100T免费代测人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白细胞分化抗原40配体(CD40)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白细胞分化抗原40L配体(CD40L)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白细胞分化抗原4(CD4)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装