亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒200T实验方法实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒200T实验方法注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
NCI-H838(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
骨细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
LTBR Others Cynomolgus 食蟹猴 LTBR / TNFRSF3 人细胞裂解液 (阳性对照)
U937细胞,人组织细胞淋巴瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞,NS1细胞 人表皮黑色素细胞-浅色素cDNAHEM-l cDNA
中国仓鼠卵巢细胞;CHO
CoC1/DDP(人卵巢耐药细胞亚株) 5×106cells/瓶×2 CL-0150MDA-MB-231(人癌细胞)5×106cells/瓶×2 Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256
兔晶体上皮细胞永生系;N/N1003A(RLE)
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人细胞裂解液 (阳性对照)
气管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
Y2细胞,小鼠成纤维细胞 人卵巢癌*耐药株,COC1/CDDP细胞 人食道上皮细胞裂解物HEEpiCL
非洲绿猴肾细胞;CV-1
IGFBP3 Others Human 人 IGFBP3 / IBP3 人细胞裂解液 (阳性对照)
ACE2 Others Rat 大鼠 ACE2 / ACEH 人细胞裂解液 (阳性对照)
人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2
NCI-H661 人大细胞肺癌细胞
mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞
人间充质干细胞-脂肪
人胚肺成纤维细胞;IMR-90 人淋巴血管内皮细胞*培养基 100mL
大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)免疫试剂盒 Human Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit
血糖含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISA试剂盒大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)酶联免疫分析大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)酶联免疫分析体(sEPCR)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Humaninterleukinreceptorassociatedkinase,IRAKELISA试剂盒人白介素受体相关激酶(IRAK)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanMyoglobin,MYO/MBELISAKit人肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
兔子*(cAMP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human thymus peptide five (TP-5) ELISA Kit 人*(TP-5)ELISA试剂盒
Humananti-nuclearfactorAntibody,ANFELISAKit 人抗核因子抗体(ANF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember12,EAR12ELISA试剂盒人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员12(EAR12)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织PKG-II激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit人状瘤病毒抗体IgM(HPV-IgM)ELISA试剂盒规格:96T/48T
亚硝酰氢(HNO)检测试剂盒200T实验方法人白细胞分化抗原14(CDl4)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白细胞调节素(LR)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白细胞弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白色念珠菌抗体(C.albicansab)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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