培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
英文名称:
产品规格:250T|500T|1000T
货号:FS-X9711
产品介绍:
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是应用二甲氧唑黄2,3-bis[2-methoxy -4-nitro-5-sμlfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。 XTT在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的一些与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan,生成的Formazan量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。 本XTT试剂为配制好的即用型试剂,直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分,XTT试剂很稳定,对细胞没有毒性,可以长时间孵育细胞。XTT 法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高,无放射性,检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT高。 储存条件:2-8℃避光保存。长期存放-20℃避光保存。 注意: 1.XTT试剂短期存放于2-8℃,长期存放请分装后-20℃避光保存。 2.避免反复冻融。 3.冻存后溶解时注意重新混匀。 有效期:一年。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
红细胞生成受体(EPOR)英文名:EPOR 自噬相关蛋白1抗体包装10MG
红细胞生成(EPO)英文名:EPO β淀粉样肽1-16/Aβ1-16 抗体包装1g
横纹肌辅肌动蛋白α(sm Actinin-α)英文名:sm Actinin-α 腺瘤肉调节蛋白抗体包装25g
黑色细胞抗体(MC Ab)英文名:MC Ab 衔接因子蛋白含pH域蛋白1抗体包装5g
黑色瘤(Melanoma)英文名:Melanoma 通道蛋白-7抗体包装1g
核转录因子kBP65(NFkBP65)英文名:NFkBP65 谷基转移1抗体包装5g
核转录因子1(AP-1)英文名:AP-1 p21活化蛋白激ARHG7抗体包装200mg
核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)英文名:NF-κB p65 磷化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体包装5g
核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)英文名:NF-κB p65 2-基乙硫双加氧抗体包装100g
核因子κB受体活化因子配基(RANKL)英文名:RANKL 血管紧张Ⅱ-1型受体抗体包装25g
核因子κB受体活化剂配体(RANKL)英文名:RANKL 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体包装5g
核因子κB(NF-κB)英文名:NF-κB 去整合样金属蛋白19抗体包装100g
核因子κB(NF-Kb)英文名:NF-Kb 原癌基因AF4蛋白抗体包装25g
核因子E2相关因子2(Nrf2)英文名:Nrf2 整合样金属蛋白与凝血样1蛋白抗体包装500g
含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激2(Tie-2)英文名:Tie-2 整合样金属蛋白与凝血样2蛋白抗体包装10g
共济失调蛋白7样1抗体白介34(IL34)Ledipasvir 是一种有效的 HCV NS5A 抑制剂,能够抑制 GT1a 和 GT1b 复制子,EC50 值分别为 34
XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒大肠埃希氏 2-巯基乙氧基乙干扰诱导T趋化因子
无壳异担子 2,4-二-5-干扰诱导蛋白10
黑曲霉 3-氨基-5,6-二甲基-1,2,4-三干扰诱导蛋白10
黄杆属 2-氨基-5,6-二氢-4H-苯并噻唑-7-酮干扰诱导蛋白4
豌豆根瘤 4-基-2-氟甲酯干因子
河生肠杆生物Ⅰ型 2-氨基-6-甲砜基苯并噻唑干因子受体
美澳型核果褐腐病 2-氨基嘧啶-5-高尔基体蛋白73
白乳菇 3-吡唑啉酮盐酸盐高密度脂蛋白
大肠埃希 5-氟-2-甲酸甲酯高密度脂蛋白胆固
固氮 2-甲氧基-5-三氟高迁移率族蛋白B1
葡萄座腔 3-氨基-4-(三氟甲基)吡啶高铁血红蛋白
柠檬黄色红色杆 7-溴-6--4(3H)-喹唑啉酮睾酮
中国台湾根霉 3-(2-氟苯基)弓形虫IgG抗体
烟色拟盘多毛孢 2,3-喹啉二甲酸二甲酯弓形虫IgM抗体
假单胞属 3-氨基-4-甲氧基苯甲酰钩端螺旋体IgG抗体
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)