普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,伊红法)100ml实验方法实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,伊红法)100ml实验方法注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
GNM(人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H034人肠动脉内皮细胞*培养基100mL
CD300LG Others Rat 大鼠 CLM-9 / TREM4 / CD300LG 人细胞裂解液 (阳性对照)
HCT-8细胞,人结肠腺癌细胞 人黑色素瘤细胞,HME4细胞 SV40T转化的人胚肾细胞;293T
Sars结构蛋白表达株;293 001B
CD274 Others Mouse 小鼠 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H097人椎间盘髓核细胞*培养基100mL
IL10RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL10RA 人细胞裂解液 (阳性对照)
人肺动脉平滑肌细胞HPASMC
RWPE2细胞,人前列腺上皮细胞 兔晶体上皮细胞永生系,N/N1003A(RLE)细胞 小鼠心肌细胞MCM
LLC-WRC 256(大鼠腹水癌细胞) 5×106cells/瓶×2
ACHN(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R043大鼠小肠平滑肌细胞*培养基100mL 人胚肺二倍体细胞;HEL-1
ATF2 Others Human 人 ATF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人膀胱基质成纤维细胞总RNAHBdSF tRNA
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO Hu 164 SCF 17
QGY-7703细胞,肝癌细胞 表皮癌细胞系,A431细胞 小鼠网织细胞肉瘤;M5076
小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP
CD38 Others Mouse 小鼠 CD38 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒 ,英文名: CTGF ELISA Kit
人血管生成素2(ANG-2)ELISA检测试剂盒HumanAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 96T/48T
水泡病毒(SVDV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
CLIAKitforNE(Rabbitneutrophilelastase)ELISAKit兔子中性粒细胞弹性蛋白酶规格:48T/96T
体液HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性检测试剂盒20次
ELISAKitNAG人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶规格:48T/96T
小鼠儿茶酚胺(CA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat endothelial lipase (EL) ELISA Kit 大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒
Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGEELISAKit 人血红蛋白晚期糖基化终末产物(Hb-AGE)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanAquaporin0,AQP-0ELISA试剂盒人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物乙醇脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒20次
Humantissueinhibitorofmetalprotease1,TIMP-1ELISAKit人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,伊红法)100ml实验方法兔子补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔子补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔子表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔子白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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