血管通透性测试染色试剂盒100ml使用说明书实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
血管通透性测试染色试剂盒100ml使用说明书注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
HBZY-1(大鼠肾小球系膜细胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H001人肺微血管内皮细胞*培养基100mL
NTRK1 Others Canine 狗 TrkA / NTRK1 人细胞裂解液 (阳性对照)
SW620细胞,人结肠癌细胞 人黑色素瘤细胞,HSC1细胞 EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0905
人胚胎,皮肤,肌肉;M-7
ASGR1 Others Mouse 小鼠 ASGPR1 / ASGR1 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠红白血病细胞;MEL
IGSF11 Others Human 人 IGSF11 / BTIGSF 人细胞裂解液 (阳性对照)
MDA-MB-231 人癌细胞
SK-BR-3人腺癌细胞 SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells DMEM培养基+10%FBS
MIF Protein Mouse 重组小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白
人胚胎气管组织来源细胞;CCC-HBE-2 人肺泡上皮细胞*培养基 100mL
TGFBR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 TGFBR2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人成纤维细胞;HFF
F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells
NW38细胞,人黑色素瘤细胞 鼠李糖乳杆菌 人神经胶质细胞瘤细胞;U251
ANGPT2 Protein Mouse 重组小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 (His 标签)
JEG-3(人绒毛膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫试剂盒 Human VCAM-1 ELISA kit
人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒 ,英文名: PM-Scl/PM-1 ELISA Kit
RatInterleukin3,IL-3ELISA试剂盒大鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISA试剂盒人*脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白(iNV)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠毒性休克综合征毒素1(TSST-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human acid phosphatase (ACP) ELISA Kit 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA试剂盒
Humanplaetfactor3,PF3ELISAKit 人*原片段F1+2(F1+2)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humanarabinogalactanproteins,AGPsELISA试剂盒人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物游离氨基酸含量荧光定量检测试剂盒20次
humanthyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit人甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA试剂盒规格:96T/48T
血管通透性测试染色试剂盒100ml使用说明书兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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