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台盼蓝染色液 (0.4%)100ml售后服务

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  • 更新时间2017-07-06
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台盼蓝染色液 (0.4%)100ml售后服务 产品详情

台盼蓝染色液 0.4%100ml售后服务使用注意事项
1.微量试剂取用前请离心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿*、戴手套等。
4.本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不*用于检测组织样本。
台盼蓝染色液 0.4%100ml售后服务操作方法
1.悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用*消化收集用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混匀;室温、避光、反应515min
3.加入500μL1×Assays Buffer悬浮细胞;
4.请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A.荧光显微镜观察
1.滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
1)将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
2)用PBS洗涤细胞两次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混匀;
4)将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;
5)避光、室温反应5 min
3.将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下观察激发波长546nm,发射波长647 nm7-AAD荧光信号呈红色。
B.流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测,激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
台盼蓝染色液 0.4%100ml售后服务实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的*消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的*消化时,注意必须*清除EDTA:在标记前用1×PBS1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTACa2+螯合,影响Annexin V的结合。
1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer
2)细胞收集。悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心510分钟,收集细胞;
3)细胞洗涤:用预冷1×PBS4)重悬细胞一次,2000rpm离心510分钟,洗涤细胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
5Annexin V-FITC标记:加入5μLAnnexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;
6PI标记:上机前5分钟再加入5μLPI染色。
7)上机前,补加200μL1×Binding Buffer
HCCC-9810(人肝内胆管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

恒河猴肾细胞;MMK3

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